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发布者：管理员 发布日期：2008年1月18日
来源：综合处 作者：
中药或保健品中总多糖含量测定（苯酚-硫酸比色法）
供试品溶液的制备： = 1 \* GB3
①提取上清液：精密称取样品细粉2.2g（约相当于多糖0.22g），置烧瓶中，加水100ml置电炉上加热回流提取1.5h，放冷至室温，3000～4000rpm离心10min，收集上清液，用少量水分次洗涤烧瓶及离心管，同样离心收集上清液。
= 2 \* GB3
②提取多糖沉淀：合并全部上清液置蒸发皿中，置电炉上小心加热（避免焦化）浓缩到约15ml，放冷至室温，加乙醇100ml，搅匀，放置使其沉淀15分钟。转移此溶液连同沉淀于离心管中，继续用少量80%乙醇以玻棒充分刮洗蒸发皿，洗液和沉淀同样转移至离心管中，以3000～4000rpm速度离心15min，弃去上清液，在离心管中加入少量80%乙醇，轻轻洗涤，同样离心弃去上清液（保留沉淀物）。
然后将离心管（连同沉淀物）于50℃烘箱挥干乙醇（不能见到任何液体），然后加热水溶解沉淀，转移至250ml量瓶中，继续用热水以玻棒充分刮洗离心管，洗液同样转移至250ml量瓶中，放冷至室温，用水定容至刻度，摇匀，精密量取5ml置100ml量瓶中，用水定容至刻度，摇匀即得供试品溶液。
标准曲线的制作：精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖适量，加水配制成0.85mg/ml的贮备液。精密吸取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0
ml分别置于50ml量瓶中加水定容至刻度，摇匀得葡萄糖稀释液。再分别精密量取上述各稀释液2
ml置具塞试管中，同时精密量取水2.0
ml置另一具塞试管中，各管分别加5%苯酚溶液（新制）1
ml，摇匀，然后迅速加入浓硫酸5.0ml，立即摇匀，于40℃水浴中保温30min，取出，置冰水浴中5
min。以上述2.0ml水所制得的空白溶液做参比，于489nm波长处测定各溶液吸收度，以葡萄糖稀释液的浓度（μg/ml）为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线。备注：在准确度要求不很高时，可用对照品一点法代替标准曲线，即对照品只做一个点（精密取5.0ml葡萄糖贮备液稀释至100ml得葡萄糖稀释液，然后进行苯酚-硫酸反应，测定吸收度）。
样品测定：取供试品溶液2.0ml置具塞试管中，按“标准曲线的制作”项下同法加苯酚溶液和浓硫酸，测定吸收度。根据样品吸收度从标准曲线上读取葡萄糖浓度，再计算出样品中总多糖的含量（以葡萄糖计）。备注：如果采用对照品一点法，则根据吸收度比值计算样品中总多糖的含量。
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